因業(yè)務(wù)調(diào)整，部分個(gè)人測試暫不接受委托，望見諒。

檢測項(xiàng)目

Western Blot驗(yàn)證檢測主要針對蛋白質(zhì)層面的生物學(xué)研究需求設(shè)計(jì)，涵蓋以下核心項(xiàng)目： 1. **目標(biāo)蛋白表達(dá)水平分析**：通過比較不同處理組或病理狀態(tài)下特定蛋白的表達(dá)差異； 2. **翻譯后修飾鑒定**：包括磷酸化、泛素化及糖基化修飾位點(diǎn)的特異性檢測； 3. **蛋白亞型區(qū)分**：基于分子量差異鑒別剪切變體或異構(gòu)體； 4. **抗體特異性驗(yàn)證**：確認(rèn)商業(yè)化或自研抗體與目標(biāo)抗原的結(jié)合特異性； 5. **蛋白相互作用間接驗(yàn)證**：通過共沉淀樣本中互作蛋白的共遷移現(xiàn)象分析。

檢測范圍

本技術(shù)適用于以下樣本類型與研究領(lǐng)域： **樣本類型**： - 細(xì)胞裂解液（貼壁/懸浮細(xì)胞） - 組織勻漿（新鮮/凍存組織） - 血清/血漿等體液樣本 - 重組蛋白純化產(chǎn)物 **應(yīng)用領(lǐng)域**： - 醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)研究：腫瘤標(biāo)志物篩選、信號通路解析 - 生物制藥開發(fā)：治療性抗體效價(jià)評估 - 疾病機(jī)制研究：神經(jīng)退行性疾病相關(guān)蛋白聚集檢測 - 農(nóng)業(yè)生物技術(shù)：轉(zhuǎn)基因作物外源蛋白表達(dá)驗(yàn)證

檢測方法

Western Blot標(biāo)準(zhǔn)操作流程包含以下關(guān)鍵步驟： 1. **樣品制備**： - 使用RIPA裂解液提取總蛋白（含蛋白酶/磷酸酶抑制劑） - BCA法測定濃度后調(diào)整上樣量至20-50μg/孔 - 加入還原型Loading Buffer煮沸變性 2. **SDS-PAGE電泳**： - 根據(jù)目標(biāo)蛋白分子量選擇8%-15%分離膠濃度 - 恒壓80V濃縮膠階段切換至120V分離膠階段 - 預(yù)染Marker監(jiān)控電泳進(jìn)程 3. **濕式轉(zhuǎn)膜**： - PVDF膜甲醇活化后與凝膠組裝"三明治"結(jié)構(gòu) - 恒流200mA轉(zhuǎn)膜1小時(shí)（依據(jù)蛋白分子量調(diào)整時(shí)長） 4. **封閉與抗體孵育**： - 5%脫脂牛奶室溫封閉1小時(shí)阻斷非特異性結(jié)合 - 一抗4℃孵育過夜（稀釋比例1:500-1:5000） - HRP標(biāo)記二抗室溫孵育1小時(shí)（稀釋比例1:5000） 5. **化學(xué)發(fā)光顯影**： - ECL底物均勻覆蓋膜表面后避光反應(yīng)1分鐘 - ChemiDoc成像系統(tǒng)捕獲信號并分析灰度值 **質(zhì)控要點(diǎn)**： - 內(nèi)參蛋白（如β-actin/GAPDH）驗(yàn)證上樣均一性 - 陰性對照排除二抗非特異性結(jié)合 - 曝光時(shí)間梯度優(yōu)化避免信號過飽和

檢測儀器

Western Blot實(shí)驗(yàn)需配置以下正規(guī)設(shè)備： 1. **垂直電泳系統(tǒng)**：實(shí)現(xiàn)蛋白質(zhì)按分子量梯度分離的核心裝置，需配備制膠模具及恒壓電源； 2. **半干/濕式轉(zhuǎn)印儀**：完成凝膠蛋白向固相載體的高效轉(zhuǎn)移； 3. **化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)**：配備CCD相機(jī)的暗箱設(shè)備，靈敏度需達(dá)到fg級蛋白檢出限； 4. **微量分光光度計(jì)**：用于BCA法等蛋白濃度定量； 5. **恒溫?fù)u床**：控制抗體孵育過程的溫度與震蕩頻率； 6. **超純水系統(tǒng)**：提供電阻率≥18.2MΩ·cm的實(shí)驗(yàn)用水。

檢測流程

1、咨詢：提品資料(說明書、規(guī)格書等)

2、確認(rèn)檢測用途及項(xiàng)目要求

3、填寫檢測申請表(含公司信息及產(chǎn)品必要信息)

4、按要求寄送樣品(部分可上門取樣/檢測)

5、收到樣品，安排費(fèi)用后進(jìn)行樣品檢測

6、檢測出相關(guān)數(shù)據(jù)，編寫報(bào)告草件，確認(rèn)信息是否無誤

7、確認(rèn)完畢后出具報(bào)告正式件

8、寄送報(bào)告原件